载体骨架信息

• 质粒骨架名称： pCold I
• 质粒骨架大小(bp)：4407
• 质粒骨架的修饰/改造：在Ndel与Sacl酶切位点间，插入ZZdomain
• 表达系统： 原核表达载体
• 质粒的功能/用途： 诱导表达载体

原核培养信息

• 菌株抗性： 氨苄青霉素（Ampicillin）
• 质粒的拷贝数： 高拷贝数
• 培养温度： 37°C
• 培养环境：表达宿主-BL21等大肠杆菌；诱导方式-IPTG或乳糖及其类似物

插入基因

• 插入基因名称：ZZdomain
• 基因别名：ZZ标签
• 插入基因/序列的物种来源： 人工合成(Synthetic)
• 融合蛋白/标签：
  • His (质粒骨架-N端)
  • Factor Xa (插入基因-N端)

插入基因克隆信息

• 启动子： CspA
• 克隆方法： 限制性内切酶法
• 5’端酶切位点： Ndel
• 5’端酶切位点克隆过程中是否被破坏： 被破坏
• 3’端酶切位点： Sacl
• 3’端酶切位点克隆过程中是否被破坏： 被破坏
• 5’端测序引物： pCold-F（GCCATATCGCCGAAAGG）
• 3’端测序引物： pCold-R（GGCAGGGATCTTAGATTCTG）

GACAACAAATTCAACAAAGAACAACAAAACGCGTTCTATGAGATCTTACATTTACCTAACTTAAACGAAGAACAACGAAACGCCTTCATCCAAAGTTTAAAAGATGACCCAAGCCAAAGCGCTAACCTTTTAGCAGAAGCTAAAAAGCTAAATGATGCTCAGGCGCCGAAAGTAGACAACAAATTCAACAAAGAACAACAAAACGCGTTCTATGAGATCTTACATTTACCTAACTTAAACGAAGAACAACGAAACGCCTTCATCCAAAGTTTAAAAGATGACCCAAGCCAAAGCGCTAACCTTTTAGCAGAAGCTAAAAAGCTAAATGATGCTCAGGCGCCGAAAGTA